Jest innym rodzajem chromatografii powinowactwa pozwalającą na separację większości białek z odsłoniętymi na ich powierzchni aminokwasami: histydyną, cysteiną lub tryptofanem. IMAC jest doskonałą techniką optymalizacji i oczyszczania białek ze znacznikiem histydynowym (His-tag). Technika ta jest idealna do wychwytywania białka bezpośrednio ze sklarowanego lizatu komórkowego. Białko docelowe jest zbierane w wysoce oczyszczonej i skoncentrowanej postaci. Kilka czynników wpływa na ostateczną czystość białka znakowanego His-tag oczyszczonego tą metodą. Zależy to od położenie znacznika (C- lub N-końcowe), długości znacznika, unieruchomionego jonu metalu (Ni2+, Co2+, Zn2+, Cu2+) i rodzaju liganda wiążącego jony metali (NTA lub IDA). Dla łatwej optymalizacji procesu oczyszczania białek ze znacznikiem His-tag firma Bio-Works oferuje produkty z wieloma kombinacjami jonów metali i unieruchomionych ligandów dostępnych w formie zawiesiny do samodzielnego upakowania kolumn oraz w kilku rodzajach kolumn GoBio:
– WorkBeads 40 Ni-NTA
– WorkBeads 40 Co-NTA
– WorkBeads 40 Zn-NTA
– WorkBeads 40 Cu-NTA
– WorkBeads 40 Ni-IDA
– WorkBeads 40 Co-IDA
– WorkBeads 40 Zn-IDA
– WorkBeads 40 Cu-IDA
a także zestawy GoBio Mini His-tag NTA Screening kit i GoBio Mini His-tag IDA Screening kit.

Więcej informacji

Umożliwiają wygodną i skuteczną immobilizację ligandów na złożu bez konieczności użycia skomplikowanych procedur. Oferowane są dwa różne wstępnie aktywowane złoża WorkBeads 40/1000 ACT i WorkBeads

40/10 000 ACT (z limitami odcięcia odpowiednio 1200 kDa i 10000 kDa), w których aktywna grupa bromohydryny reaguje z grupami tiolowymi, aminowymi i hydroksylowymi. Złoża dostępne są w formie zawiesiny do samodzielnego upakowania kolumn, a złoże WorkBeads 40/1000 ACT dostępne jest w formie upakowanych kolumn GoBio Mini (1 mL i 5 mL).
Schemat reakcji prowadzącej do immobilizacji liganda

Więcej informacji

Jest bardzo przydatną techniką rozdzielania białek na podstawie różnic ich elektrycznego ładunku powierzchniowego netto w stosunku do pH otoczenia. Każde białko ma swój własny stosunek ładunku do pH. Technika IEX jest odpowiednia dla większości białek, peptydów, wirusów, szczepionek i oligonukleotydów. IEX to uniwersalna technika odpowiednia na wszystkich etapach oczyszczania.

Zwana także filtracją żelową (Gel Filtered Chromatography – GFC), służy do rozdziela cząsteczek na podstawie różnic w ich wielkości. Ponieważ jest to technika niewiążąca, wybór buforów roboczych jest duży i można je zoptymalizować pod kątem cząsteczki docelowej. Aby uzyskać najlepszą rozdzielczość podczas korzystania z SEC, należy zastosować małą prędkość przepływu i objętość próbki wynoszącą maksymalnie 4% objętości kolumny. Dlatego ta technika najlepiej nadaje się do etapu doczyszczania białek, peptydów, wirusów, białek i peptydów znakowane oraz oligonukleotydów. Dostępnych jest kilka różnych rozmiarów porowatości złóż WorkBeads SEC przeznaczonych dla separacji makrocząsteczek o różnych rozmiarach:
• WorkBeads 40/100 SEC (zakres separacji 10-150 kDa)
• WorkBeads 40/1000 SEC (zakres separacji 10-1200 kDa)
• WorkBeads 40/10 000 SEC (zakres separacji 10-10000 kDa)
• WorkBeads Macro SEC (zakres separacji 10-30000 kDa)
• WorkBeads 200 SEC (zakres separacji 10-6000 kDa).
Oferowane złoża wyprodukowane zostały przy wykorzystaniu unikalnej, zastrzeżonej metody sieciowania, która pozwala na otrzymanie wysoce porowatych, ale fizycznie stabilnych ziaren złoża odpornego na silne środki stosowane do jego czyszczenia. Złoża dostępne są w formie zawiesiny do samodzielnego upakowania kolumn, oraz w formie gotowych do użycia kolumn GoBio.
Wymiana buforu/odsalanie
Chromatografia wykluczania prowadzona na złożach o niskiej porowatości pozwala na szybką i łatwą wymianę buforu i/lub odsalanie próbki. Odsalanie odbywa się przy objętościach próbek do 30% objętości kolumny w ciągu kilku minut dla prac w skali laboratoryjnej. Można stosować do prac z białkami i dużymi peptydami (M_r > 5000 kDa), oraz kwasami nukleinowymi, a także separacji wyznakowanych biocząsteczek od niezwiązanego znacznika. Złoża WorkBeads Dsalt przygotowane są w postaci wstępnie spęczniałych ziaren i dostępne są w formie zawiesiny do samodzielnego upakowania kolumn, oraz w formie gotowych do użycia kolumn GoBio.

Więcej informacji